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對于剛剛應(yīng)用液相色譜儀的人來說，一時很難弄清楚液相色譜儀的工作原理和保養(yǎng)知識因此我們?nèi)鹞鲂【帨?zhǔn)備介紹一下液相色譜儀的工作原理和保養(yǎng)知識大家感興趣的話可以了解一下。

液相色譜儀的工作原理

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

液相色譜儀的保養(yǎng)

HPLC的日常操作條件：溫度：10～30℃；相對濕度小于80％；好是恒溫、恒濕，遠離高電磁干擾、高振動設(shè)備，有良好的通風(fēng)設(shè)施。

HPLC的環(huán)境設(shè)置：

HPLC用水可以通過以下幾個方面來得到：

1專門的純水機或超純水機；

2去離子水重蒸；

3二次或三次重蒸水；

4采用類似家用的純水機；

5市場上瓶裝的純凈水或蒸餾水；

6其它途徑；

不管采用何種途徑，配制流動相應(yīng)用新鮮水，水質(zhì)越高放置時間越短。理想的HPLC用水應(yīng)為18.2Ω的超純水，并通過0.22um的濾膜，除去熱源、有機物、無機離子及空氣等。

HPLC六通閥進樣器的使用及保養(yǎng)

六通閥進樣器是液相色譜系統(tǒng)中理想的進樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。美國Rheodyne公司的六通閥進樣器為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進樣器。

工作原理：手柄位進樣(Load)位置時，樣品經(jīng)微量進樣針從進樣孔注射進定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔排出；將手柄轉(zhuǎn)動至進樣(Inject)位置時，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動相沖洗定量環(huán)，推動樣品進入液相分析柱進行分析。

雖然六通閥進樣器具有結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、壽命長、日常無需維修等特點，但正確的使用和維護將能增加使用壽命，保護周邊設(shè)備，同時增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑挘ㄩy進樣器一般可連續(xù)進樣3萬次而無需維修。手柄處于Load和Inject之間時，由于暫時堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動閥，不能停留在中途。在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。

六通閥進樣器的進樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。使用部分裝液法進樣時，進樣量多為定量環(huán)體積的75％，如20μl的定量環(huán)多進樣15μl的樣品，并且要求每次進樣體積準(zhǔn)確、相同；使用*裝液法進樣時，進樣量少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20μl的定量環(huán)少進樣60至100μl的樣品，這樣才能*置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進樣針配合20ul滿環(huán)進樣。

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